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因不能面诊，医生的建议仅供参考，具体诊疗请一定到正规医院在医生指导下进行。
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陈贤楠主任医师
病情分析：你好,免疫组化的概念是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素,酶,金属离子,同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位,定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immuohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immuocytochemistry).●免疫组化的分类免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法,免疫酶法,免疫铁蛋白法,免疫金法及放射免疫自影法等.●免疫组化实验所用的组织和细胞标本实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片,后者包括组织印片,细胞爬片和细胞涂片.其中石蜡切片是制作组织标本最常用,最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察；还能长期存档,供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优选的组织标本制做.●免疫组化实验所用的抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体.单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备.多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物.●免疫组化常用的染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法.这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其克克常规药物—抗常规药物染色法最常用.●免疫组化操作步骤一免疫组化（LP法）操作步骤：1.切片常规脱蜡至水.如需抗原修复,可在此步后进行2.缓冲液洗i/2次.3.为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在HydrogePeroxideBlock中孵育10-15分钟.4.缓冲液洗i/2次.5.滴加UltraVBlock,在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色.（注：孵育不要超过10分钟,否则会导致特异性染色降低.如果一抗的稀释液中含有5－10%正常羊血清,这一步可以省略.）6.缓冲液洗i/2次.7.滴加一抗工作液37℃孵育1－2小时.（具体孵育时间和温度由试验者最终决定）8.缓冲液洗i/2次.9.滴加PrimaryAtibodyEhacer(增强子),在室温下孵育20分钟.10.缓冲液洗i/2次.11.滴加HRPPolymer(酶标二抗),在室温下孵育30分钟.（注：HRPPolymer对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中.）12.缓冲液洗i/2次.13.向DABPlusSubstrate(或AECPlusSubstrate)中滴加1-2滴DABPlusChromoge（或AECPlusChromoge）,混匀后滴加到切片上,孵育3－15分钟.（具体时间由染色深浅决定.）14.自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片.二.免疫组化(三步法)操作步骤：（1）,石蜡切片脱蜡至水.（2）,3%H2O2室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性.（3）,蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟x2（如需抗原修复,可在此步后进行）.（4）,5-10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭,室温孵育10分钟,倾去血清,勿洗.滴加一抗工作液,37℃孵育1-2小时或4℃过夜.（5）,PBS冲洗,5分钟x3次.（6）,滴加适量常规药物标记二抗工作液,37℃孵育10-30分钟.（7）,PBS冲洗,5分钟x3次.（8）,滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液,37℃孵育10-30分钟.（9）,PBS冲洗,5分钟x3次.（10）,显色剂显色3-15分钟（DAB或NBT/BCIP）（11）,自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片.三.冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片4-8um,室温放置30分钟后,入4℃丙酮固定10分钟,PBS洗,5分钟x3,克克常规药物孵育5-10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性.●免疫组化实验结果的判定和分析从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要.关于上述服务内容要在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等.如果为双盲试验或有三方参与,则事先申明.]●免疫组化在临床工作的意义近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断.在常规肿瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断.尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%.免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位；(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型；（4）软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类,因其种类多,组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；（5）发现微小转移灶,有助于临床治疗方案的确定,包括手术范围的确定.（6）为临床提供治疗方案的选择.
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